Lucrări de laborator - biochimie

1) Determinarea bactereologica a mezofilelor;

2) Determinarea bactereologica a coliformilor totali;

3) Determinarea bactereologica a coliformilor fecali;

4) Determinarea bactereologica a streptococilor fecali;

5) Sterilizarea sticlariei de lucru;

Sterlizarea sticlariei de lucru

Pentru determinarea caracteristicilor fizice, chimice si bacteriologice ale unor probe, recipientele de sticla cu care se va lucra trebuie sa fie spalate succesiv cu apa, detergent, amestec sulfo-cromic si apa distilata.

Detergentii care contin fosfati nu trebuie folositi pentru curatirea recipientelor in care se prelevreaza probe pentru determinarea continutului de fosfati sau de detergenti anionici.

Recipientele fabricate din materiale plastice se vor curata in general umplandu-se cu HNO3 1M sau HCl 1M, lasandu-se 1-2 zile si apoi spalandu-se cu apa si apa distilata.

Recipientele de sticla opaca folosite pentru prelevarea probelor destinate determinarii continutului de pesticide, ierbicide si rezidurile lor trebuie spalate succesiv cu apa, detergent, apa si apa distilata, iar apoi uscate in etuva. Dupa racire recipientele se vor clati cu hexan si eter etilic si se vor usca si curent de aer.

Sterilizarea flacoanelor se va face dupa ce acestea au fost spalate, limpezite si uscate.

Partea superioara a flacoanelor cu dopuri de sticla se va infasura in hartie, care va fi legata cu o sfoara de gatul sticlei. Intre dop si gatul flaconului va fi introdusa o fasie de hartie sau o sfoara.

Sterilizarea se va face in etuva, in mediu uscat la o temperaura de 180 grade Celsius timp de o ora sau in autoclava, in mediu umed, la 1 atm, la o temperatura de 121 grade Celsius, timp de 20 minute.

In cazul determinarii numarului de bacterii coliforme sterilizarea se va desfasura dupa urmatoarea procedura:

Suportul pentru filtru se sterilizeaza in autoclava timp de 30 de minute

la 121 grade Celsius impachetat in hartie impreuna cu flaconul conic cu tub lateral.

Cutiile Petri, cilindri gradatisi pipetelese vor impacheta in hartie si se vor steriliza la in etuva la180 grade Celsius, timp de o ora.

Rondelele de hartie de filtru se introduc in cutiile Petri care se impacheteaza in hartie si se sterilizeaza in etuva ca si acestea.

Membranele filtrante se vor steriliza conform indicatiilor de lucru ale furnizorului.

In cazul Mediului Cetrimid Agar:

Se dizolva componentele la cald in apa,

Se corecteaza pH-ul la 7.2,

Se filtreza prin vata,

Se repartizeaza in flacoane,

Se sterilizeaza la 120 grade Celsius timp de 20 minute.

In cazul mediului agar dezoxicolat lactoza sterilizarea se

va face la115 grade Celsius.

Determinarea numarului de

bacterii coliforme fecale

Principile metodei:

Prezenta bacterilor coliforme fecale se pune in evidenta plecand de la flacoanele si eprubetele pozitive in testul de prezumtie pentru bacteriile coliforme totale prin confirmarea in mediu selectiv lichid la temperatura de 44+-0.5 grade Celsius timp de 24 de ore.

Luand in considerare numarul de tuburi pozitive se va calcula, folosind valorile din tabele, numarul probabil de bacterii coliforme fecale.

Materiale si medii de cultura:

Eprubete de 16x160 mm sterile;

Pipete Pasteur sterile;

Termostat;

Mediu bulion bila lactoza bromeresol purpur (Mac Conkey);

Mediu bulion bila lactoza verde briliant (BBLV).

Mod de lucru:

Pentru confirmarea bacterilor coliforme fecale, din aceleasi flacoane ca si eprubetele cosiderate pozitive la testul de prezumtie, din care s-au facut treceri penru determinarea bacterilor coliforme se trece cu pipeta Pasteur una sau doua picaturi in eprubeta care contine unul din cele doua medii.

Probele se incubeaza la 44 grade Celsius timp de 24 ore.

Virarea culorii mediului in galben concomitent cu producerea de gaz datorat fermentarii lactozei indica prezenta bacterilor coliforme fecale.