Microbiologie

Distrugerea microorganismelor sau sterilizarea este indispensabila pentru pregatirea materialului de lucru si a mediilor de cultura. Sterilizarea reprezinta operatia de distrugere sau indepartare a tuturor formelor vegetative si de rezistenta a microorganismelor patogene si nepatogene.

Un produs este considerat steril cand nu mai contine forme de microorganisme ce pot fi revitalizate. Exista mai multe procedee de sterilizare care corespund diferitelor tipuri de materiale ce trebuie tratate. Metode de realizare a sterilizarii:

a) cu aer cald (140-200 ?C);

b) cu vapori sub presiune (120-140 ?C);

c) prin incalziri repetate (70-100 ?C);

d) filtrare prin materiale poroase;

e) utilizarea radiatiilor (UV, IR, raze X, raze gamma, etc.)

f) utilizarea agenfilor chimici (oxid de etilena, formaldehida, etc.)

g) preparare pe cale aseptica.

Produsele sterilizate nu trebuie sa contina microorganisme vii sub forma vegetativa sau sporulenta capabile sa se dezvolte in conditii adecvate. Metoda de sterilizare se alege in functie de proprietatile fizico-chimice ale produsului supus sterilizarii evitandu-se eventualele modificari din punct de vedere al calitatii acestuia.

Metodele a)-c) sunt metode termice si se pot realiza prin incalzire uscata (a) si incalzire umeda (b-c). Ultima varianta este destui de eficienta deoarece aburul si apa calda actioneaza prin hidratare cu coagularea si hidroliza proteinei bacteriene.

Sterilizarea prin metoda d) se utilizeaza frecvent in cazul produselor termolabile si cand cheltuielile prin (a-c) sunt foarte mani se utilizeaza filtre (placi) poroase, Jena G5, de azbest-celuloza; cu membrana. Sterilizarea prin e) desi prezinta unele dezavantaje este aplicata tot mai mult in special pentru aerul din boxe sterile. Sterilizarea prin f) se aplica produselor termolabile la rece cu etilenoxid, formaldehida, fenol, etc. Se poate utiliza combinatia a)-c) si adaugare de substante chimice ca: aldehida formica, apa oxigenata, acid 5-nitrofenilacrilic.

Prepararea pe cale aseptica se foloseste atunci cand nu este posibila sterilizarea prin a)-e), realizandu-se in boxe sterile in care aerul din acestea se sterilizeaza prin d)-f). In laboratorul de microbiologie de analize de rutina, caldura reprezinta modalitatea de sterilizare cea mai intrebuintata.

STERILIZAREA PRIN CALDURA

Caldura umeda

Sterilizarea prin caldura umeda se efectueaza in autoclavul cu aburi prin procedeul de autoclavare.

Principiu: In atmosfera de vapori de apa sub presiune, toate bacteriile (inclusiv formele sporulate) sunt omorate dupa. 20 minute la 121 C. Aceasta este metoda cea mai eficienta de sterilizare.

Autoclavul permite:

- pregatirea materialului (medii de cultura, diferite obiecte) in

vederea utilizarii in laborator, prin distrugerea microorganismelor;

- decontaminarea materialelor dupa folosirea in laborator

Tehnici de sterilizare a obiectelor in laboratorul de microbiologie