Microbiologie

Principiul metodei: Microorganismele pot fi cultivate pe medii de cultura in placi Petri sau in tuburi, atat pentru studiul lor, pentru conservarea lor prin refrigerare, cat si pentru obtinerea culturilor stoc si de lucru, in diversele procese biotehnologice. Operatia de trecere a unei culturi dintr-un vas de cultura in altul se numeste repicare sau trecere, iar fragmentul de cultura ce se trece pe alt mediu se numeste inoculum.

In jurul flacarii becului de gaz exista o zona sterila cu diametrul de aproximativ 20 cm, in lipsa curentilor de aer. Toate manipularile care necesita deschiderea recipientelor sterile sau continand culturi trebuie efectuate in aceasta zona de protectie!!

1. INSAMANTAREA IN TUBURI

Materiale utilizate:

- culturi de MO pe agar nutritiv;

- fir de inoculare;

- bec de gaz;

- eprubete cu mediu sterilizat si inclinat (nutrient-agar / extract de malt-agar / extract de cartof-dextroza-agar);

- termostat la 30 ?C;

- lampa bactericide.

Mod de lucru:

Insamantarea cu ansa

Se sterge suprafata din interiorul nisei de lucru cu un tampon imbibat cu alcool 95%. Se aprinde lampa bactericide si se lasa 15 minute pentru sterilizarea incintei de lucru. Se spala mainile cu sapun, apoi se clatesc cu alcool. Se aprinde becul de gaz si se regleaza flacara, care trebuie sa aiba conul de culoare albastra.

Se tine eprubeta in care exists cultura ce trebuie repicata cu mana stanga, in pozitie oblica sau chiar orizontala. In mana dreapta se tine acul de repicat. Acesta se arde in flacara becului de gaz, tinandu-1 in pozitie verticals pentru ca flacara sa. cuprinda o portiune cat mai mare din el, Se tine in flacara pana ce mai mult de jumatate din ac se inroseste, apoi se plimba de 2 -3 ori si restul acului pana la maner, in flacara.

Dupa aceea se apropie gura eprubetei de flacara si, cu degetul mic de la mana dreapta indoit, se trage afara dopul de vata din gura eprubetei, apucandu-l de capatul ramas afara. Nu i se da drumul dopului pe masa ci se tine tot timpul in mana. Se trece gura eprubetei de 2 -3 ori prin flacara. Se introduce acul fierbinte in eprubeta si se raceste, nu in cultura, ci alaturi, pe o portiune de agar fara cultura. Se ia apoi o foarte mica portiune (de 1 - 2 mm) din cultura pe varful acului (se alege portiunea cea mai tipica si mai curata a culturii respective).

Se scoate acul din eprubeta, se arde din nou gura eprubetei si se astupa cu dopul de vata din mana dreapta. Se lasa jos eprubeta si se ia, tot cu mana stanga, o alta eprubeta cu mediu steril.

Acul de repicat cu fragmentul de cultura, se tine mai departe in mana dreapta ferindu-1 acum de flacara. Se procedeaza cu eprubeta a doua la fel cum s-a procedat cu prima, adica: se tine in pozitie orizontala sau putin oblica in mana stanga, se scoate dopul cu degetul eel mic de la mana dreapta indoit, tinandu-se tot timpul operatiei de repicare in mana. Se trece gura eprubetei prin flacara, se introduce acul de repicare cu fragmentul de cultura, atingand usor mediul (in central eprubetei), pana ce partea din cultura ramane pe mediu. Uneori este bine ca fragmentul de cultura sa fie putin afundat in mediu, pentru a face un contact mai strans cu el.

Se scoate acul de repicat din eprubeta, se arde din nou gura eprubetei si se astupa cu dopul din mana dreapta. Se trece si capatul dopului care a fost tinut cu mana prin flacara, dar foarte rapid.

Se arde din nou acul in flacara pana. la rosu. Aceasta operatie este absolut necesara si trebuie facuta cu rabdare, pentru a se evita infectarea mediilor urmatoare. Dupa arderea acului se ia din

Insamantarea culturilor de bacterii, drojdii si mucegaiuri