Principii de genetică

Tehnologia ADN recombinant (clonare genica) asigura transferul de material genetic de la o specie la alta, mai mult sau mai putin indepartata filogenetic.

Un sistem clonator de gene are 5 componente:

AND pasager (exogen, heterolog) ce urmeaza a fi transferat in celula gazda si care contine gena sau genele de interes; are greutate moleculara mica;

Vectorul sau vehiculul care transfera genele, le multiplica si le mentine in celula gazda. Poate fi:

plasmid,

bacteriofag l sau derivati ai acestuia,

alte virusuri,

cosmid (plasmid + situsul cos de la fagul l),

fagimid (plasmid + ADN de la fagi filamentosi).

Endonucleaze de restrictie care “taie” in situsuri specifice si formeaza capete adezive (coezive sau lipicioase) sau netede;

AND-ligaze ce catalizeaza legarea covalenta a ADN-ului pasager la vector;

Celula gazda (E. coli, S. cerevisiae, alte celule: vegetale sau animale)

Etapele principale ale unei experiente de transfer de gene:

Obtinerea fragmentelor de ADN pasager (heterolog) prin PCR sau reverstranscriere;

Obtinerea ADN vector (de regula sunt comercializati);

Insertia pasagerului in vector cu ajutorul unor ligaze specifice și obtinerea moleculelor de ADN hibride (recombinante);

Introducerea ADN recombinant (hibrid) in celula gazda (prin unul din mecanismele: conjugare, transductie, transfectie);

Selectia, contraselectia si caracterizarea recombinantilor;

Exprimarea moleculelor de ADN clonate in celula gazda.